کلون‌سازی و بیان سیتوپلاسمی L-آسپاراژیناز II در باکتری اشریشیا کلی

سابقه و هدف: ال-آسپاراژیناز (تیپ II) با فعالیت ضدتوموری به طور طبیعی توسط باکتری اشریشیا کلی تولید می‌گردد. این آنزیم با تبدیل ال- آسپاراژین موجود در خون به آمونیوم و آسپارتیک اسید، در درمان لوکمیای لمفوبلاستیک حاد (ALL) مورد استفاده قرار می‌گیرد. هدف از این پژوهش، تولید سیتوپلاسمی آنزیم ال- آسپاراژیناز II و کلون‌سازی ژن آن بدون سیگنال پپتید و حذف متیونین ابتدایی بود. مواد و روش‌ها: در ابتدا ژن ال- آسپاراژیناز II با روش PCR از اشریشیا کلی سویه K12 جداسازی و درون وکتور بیانی pET32 مهندسی شده کلون گردید. توالی‌یابی و ارزیابی بیان ژن مورد نظر مطابق با روش‌های متداول به انجام رسیدند. سپس پلاسمید نوترکیب حاوی ژن متیونین آمینوپپتیداز خالص سازی گردید و با روش شوک حرارتی به درون باکتری تولید کننده آسپاراژیناز نوترکیب انتقال داده شد. یافته‌ها: بیان ال- آسپاراژیناز سیتوپلاسمی بیش از نوع پری‌پلاسمی بود. همچنین با توجه به بیان بالای آنزیم متیونین آمینوپپتیداز در میزبان بیانی اشریشیا کلی Origami، انتظار می‌رود که این آنزیم به طور مؤثری توانسته موجب حذف متیونین ابتدایی ال- آسپاراژیناز شود. نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده در این مطالعه در راستای معرفی میزبان با قابلیت بیان بالای ال- آسپاراژیناز نوترکیب در سیتوپلاسم، می‌تواند گامی بزرگ در مسیر درمان لوکمی لنفوبلاستیک حاد و نیز افزایش تولید این آنزیم در صنعت محسوب گردد.